表1:各培地用原液の組成
表2:不定胚を用いた遺伝子銃法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成
表3:子葉節を用いたアグロバクテリウム法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成
表1 各培地用原液の組成 | ||
FN Lite マクロ ×20倍液(1L) |
(NH4)2SO4 | 9.25 g |
KNO3 | 56.41 g | |
MgSO4 7H2O | 7.39 g | |
KH2PO4 | 3.81 g | |
FNカルシウム ×20倍液(1L) |
CaCl2 2H2O | 5.88 g |
B5マクロ ×10倍液(1L) |
(NH4)2SO4 | 1.34 g |
KNO3 | 25.28 g | |
MgSO4 7H2O | 2.46 g | |
NaH2PO4 2H2O | 1.5 g | |
B5カルシウム ×100倍液(500ml) |
CaCl2 2H2O | 7.5 g |
B5ビタミン ×100倍液(500ml) |
myo-Inositol | 5 g |
Nicotinic Acid | 50 mg | |
Pyridoxine-HCl | 50 mg | |
Thiamine-HCl | 500 mg | |
B5マイナー ×100倍液(500ml) |
H3BO3 | 150 mg |
MnSO4 H2O | 500 mg | |
ZnSO4 7H2O | 100 mg | |
KI | 37.5 mg | |
Na2MoO4 2H2O | 12.5 mg | |
CuSO4 | 1.25 mg | |
CoCl2 6H2O | 1.25 mg | |
MSマクロ溶液 1 ×50倍液(1L) |
NH4NO3 | 82.45 g |
KNO3 | 95.55 g | |
KH2PO4 | 8.175 g | |
H3BO3 | 310 mg | |
MnSO4 H2O | 845 mg | |
ZnSO4 7H2O | 430 mg | |
KI | 41.5 mg | |
Na2MoO4 2H2O | 12.5 mg | |
CuSO4 5H2O | 1.25 mg | |
CoCl2 6H2O | 1.25 mg | |
MSマクロ溶液 2 ×100倍液(500ml) |
CaCl2 2H2O | 21.33 g |
MSマクロ溶液 3 ×100倍液(500ml) |
MgSO4 7H2O | 18.48 g |
Fe-EDTA ×100倍液(500ml) |
Na2-EDTA | 1.87 g |
FeSO4 7H2O | 1.39 g |
表2 不定胚を用いた遺伝子銃法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成 | ||
不定胚誘導培地 (MSD40 pH7.0) |
MSマクロ溶液 1 | 1× |
MSマクロ溶液 2 | 1× | |
MSマクロ溶液 3 | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 30 g/L | |
2,4-D | 40 mg/L | |
ゲルライト | 2 g/L | |
遺伝子導入培地 (MSD20 pH5.8) |
MSマクロ溶液 1 | 1× |
MSマクロ溶液 2 | 1× | |
MSマクロ溶液 3 | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 30 g/L | |
2,4-D | 20 mg/L | |
ゲルライト | 2 g/L | |
不定胚増殖および選抜培地 (FN Lite pH5.8) |
FN Lite マクロ | 1× |
FN Lite カルシウム | 1× | |
MSマイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 10 g/L | |
2,4-D | 5 mg/L | |
アスパラギン一水和物 |
1 .14g/L |
|
ハイグロマイシン | 0〜45 mg/L | |
不定胚成熟培地 (FNL0S3S3 pH5.8) |
FN Lite マクロ | 1× |
FN Lite カルシウム | 1× | |
MSマイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 30 g/L | |
ソルビトール | 30 g/L | |
アスパラギン一水和物 | 1.14 g/L | |
発芽培地 (MS0 pH5.8) |
MSマクロ溶液 1 | 1× |
MSマクロ溶液 2 | 1× | |
MSマクロ溶液 3 | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 15 g/L | |
ゲルライト | 2 g/L | |
発根培地 (0.5×B5 pH5.8) |
B5マクロ | 0.5× |
B5カルシウム | 0.5× | |
B5マイナー | 0.5× | |
Fe-EDTA | 0.5× | |
B5ビタミン | 0.5× | |
ショ糖 | 20 g/L | |
MES | 0.5 g/L | |
ゲルライト | 3.3 g/L |
表3 子葉節を用いたアグロバクテリウム法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成 | ||
発芽培地 (B5 pH5.8) |
B5マクロ | 1× |
B5マイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
ショ糖 | 20 g/L | |
Phytagel | 3 g/L | |
共存培地 (CCM pH5.4) |
B5マクロ | 0.1× |
B5マイナー | 0.1× | |
Fe-EDTA | 0.1× | |
B5ビタミン | 1× | |
MES | 20 mM 4.265 g/L | |
ショ糖 | 30 g/L | |
Phytagel | 3 g/L | |
BAP1, 2) | 1.67 mg/L | |
ジベレリン酸1) | 0.25 mg/L | |
アセトシリンゴン1) | 40 mg/L | |
L-システイン1) | 400 mg/L | |
チオ硫酸ナトリウム | 250 mg/L | |
DTT 1, 3) | 150 mg/L | |
不定芽誘導および不定芽選抜培地 (SIM pH5.6) |
B5マクロ | 1× |
B5マイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
MES | 0.64 g/L | |
ショ糖 | 30 g/L | |
Phytagel | 3 g/L | |
BAP1, 2) | 1.67 mg/L | |
グルホシネートアンモニウム1) | 0〜6 mg/L | |
バンコマイシン1) | 50 mg/L | |
チカルシリン1) | 50 mg/L | |
セファタキシム1) | 50 mg/L | |
不定芽伸長培地 (SEM pH5.6) |
MSマクロ溶液 1 | 1× |
MSマクロ溶液 2 | 1× | |
MSマクロ溶液 3 | 1× | |
MSマイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
MES | 0.64 g/L | |
ショ糖 | 30 g/L | |
Phytagel | 3 g/L | |
ジベレリン酸1) | 0.5 mg/L | |
グルホシネートアンモニウム1) | 3 mg/L | |
バンコマイシン1) | 50 mg/L | |
チカルシリン1) |
50 mg/L |
|
セファタキシム1) |
50 mg/L |
|
アスパラギン1) |
50 mg/L |
|
グルタミン | 50 mg/L | |
IAA1, 4) | 0.1 mg/L | |
ゼアチンリボシド1) | 1 mg/L | |
発根培地 (RM pH5.6 ) |
MSマクロ溶液 1 | 1× |
MSマクロ溶液 2 | 1× | |
MSマクロ溶液 3 | 1× | |
MSマイナー | 1× | |
Fe-EDTA | 1× | |
B5ビタミン | 1× | |
MES | 0.64 g/L | |
ショ糖 | 10 g/L | |
Phytagel | 3 g/L | |
IBA1, 5) | 1 mg/L | |
YEP培地 (YEP pH7.0) |
Peptone | 10 g/L |
Yeast extract | 5 g/L | |
塩化ナトリウム | 5 g/L | |
細菌培養用寒天 | 15 g/L |
1)ろ過滅菌する。2)6-Benzyl-aminopurine 3)Dithiothreitol 4)Indole-3- acetic acid 5)Indole-3-butyric acid