培地組成

表1:各培地用原液の組成

表2:不定胚を用いた遺伝子銃法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成

表3:子葉節を用いたアグロバクテリウム法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成


表1 各培地用原液の組成
  FN Lite マクロ
   ×20倍液(1L)
(NH4)2SO4 9.25 g
KNO3 56.41 g
MgSO4 7H2O 7.39 g
KH2PO4 3.81 g
  FNカルシウム
   ×20倍液(1L)
CaCl2 2H2O 5.88 g
  B5マクロ
   ×10倍液(1L)
(NH4)2SO4 1.34 g
KNO3 25.28 g
MgSO4 7H2O 2.46 g
NaH2PO4 2H2O 1.5 g
  B5カルシウム
   ×100倍液(500ml)
CaCl2 2H2O 7.5 g
  B5ビタミン   
   ×100倍液(500ml)
myo-Inositol 5 g
Nicotinic Acid 50 mg
Pyridoxine-HCl 50 mg
Thiamine-HCl 500 mg
  B5マイナー   
   ×100倍液(500ml)
H3BO3 150 mg
MnSO4 H2O 500 mg
ZnSO4 7H2O 100 mg
KI 37.5 mg
Na2MoO4 2H2O 12.5 mg
CuSO4 1.25 mg
CoCl2 6H2O 1.25 mg
  MSマクロ溶液 1
   ×50倍液(1L)
NH4NO3 82.45 g
KNO3 95.55 g
KH2PO4 8.175 g
H3BO3 310 mg
MnSO4 H2O 845 mg
ZnSO4 7H2O 430 mg
KI 41.5 mg
Na2MoO4 2H2O 12.5 mg
CuSO4 5H2O 1.25 mg
CoCl2 6H2O 1.25 mg
  MSマクロ溶液 2
   ×100倍液(500ml)
CaCl2 2H2O 21.33 g
  MSマクロ溶液 3
   ×100倍液(500ml)
MgSO4 7H2O 18.48 g
  Fe-EDTA   
   ×100倍液(500ml)
Na2-EDTA 1.87 g
FeSO4 7H2O 1.39 g

表2 不定胚を用いた遺伝子銃法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成
  不定胚誘導培地
   (MSD40 pH7.0)
MSマクロ溶液 1
MSマクロ溶液 2
MSマクロ溶液 3
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 30 g/L
2,4-D 40 mg/L
ゲルライト 2 g/L
  遺伝子導入培地
   (MSD20 pH5.8)
MSマクロ溶液 1
MSマクロ溶液 2
MSマクロ溶液 3
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 30 g/L
2,4-D 20 mg/L
ゲルライト 2 g/L
  不定胚増殖および選抜培地
   (FN Lite pH5.8)
FN Lite マクロ
FN Lite カルシウム
MSマイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 10 g/L
2,4-D 5 mg/L
アスパラギン一水和物

1 .14g/L

ハイグロマイシン 0〜45 mg/L
  不定胚成熟培地
   (FNL0S3S3 pH5.8)
FN Lite マクロ
FN Lite カルシウム
MSマイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 30 g/L
ソルビトール 30 g/L
アスパラギン一水和物 1.14 g/L
  発芽培地
   (MS0 pH5.8)  
MSマクロ溶液 1
MSマクロ溶液 2
MSマクロ溶液 3
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 15 g/L
ゲルライト 2 g/L
  発根培地
   (0.5×B5 pH5.8)
B5マクロ 0.5×
B5カルシウム 0.5×
B5マイナー 0.5×
Fe-EDTA 0.5×
B5ビタミン 0.5×
ショ糖 20 g/L
MES 0.5 g/L
ゲルライト 3.3 g/L

表3 子葉節を用いたアグロバクテリウム法によるダイズ形質転換体の作出に使用する培地とその組成
  発芽培地
   (B5 pH5.8)
B5マクロ
B5マイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
ショ糖 20 g/L
Phytagel 3 g/L
  共存培地
   (CCM pH5.4)
B5マクロ 0.1×
B5マイナー 0.1×
Fe-EDTA 0.1×
B5ビタミン
MES 20 mM 4.265 g/L
ショ糖 30 g/L
Phytagel 3 g/L
BAP1, 2) 1.67 mg/L
ジベレリン酸1) 0.25 mg/L
アセトシリンゴン1) 40 mg/L
L-システイン1) 400 mg/L
チオ硫酸ナトリウム 250 mg/L
DTT 1, 3) 150 mg/L
  不定芽誘導および不定芽選抜培地
   (SIM pH5.6)
B5マクロ
B5マイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
MES 0.64 g/L
ショ糖 30 g/L
Phytagel 3 g/L
BAP1, 2) 1.67 mg/L
グルホシネートアンモニウム1) 0〜6 mg/L
バンコマイシン1) 50 mg/L
チカルシリン1) 50 mg/L
セファタキシム1) 50 mg/L
  不定芽伸長培地
   (SEM pH5.6)
MSマクロ溶液 1
MSマクロ溶液 2
MSマクロ溶液 3
MSマイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
MES 0.64 g/L
ショ糖 30 g/L
Phytagel 3 g/L
ジベレリン酸1) 0.5 mg/L
グルホシネートアンモニウム1) 3 mg/L
バンコマイシン1) 50 mg/L
チカルシリン1)

50 mg/L

セファタキシム1)

50 mg/L

アスパラギン1)

50 mg/L

グルタミン 50 mg/L
IAA1, 4) 0.1 mg/L
ゼアチンリボシド1)     1 mg/L
  発根培地
   (RM pH5.6 )
MSマクロ溶液 1
MSマクロ溶液 2
MSマクロ溶液 3
MSマイナー
Fe-EDTA
B5ビタミン
MES 0.64 g/L
ショ糖 10 g/L
Phytagel 3 g/L
IBA1, 5) 1 mg/L
  YEP培地
   (YEP pH7.0)
Peptone 10 g/L
Yeast extract 5 g/L
塩化ナトリウム 5 g/L
細菌培養用寒天 15 g/L

 1)ろ過滅菌する。2)6-Benzyl-aminopurine 3)Dithiothreitol 4)Indole-3- acetic acid 5)Indole-3-butyric acid