有機リン農薬簡易検出法
尿中有機リン農薬の定性試験（ニトロベンジルピリジン法）
方法
尿1 mlを密栓ができる透明試験管（テフロンシール付きスクリューキャップ試験管）にとる．
0.1 mlの45% 4-(4-ニトロベンジル)ピリジンのアセトン溶液を加え30秒撹拌．
100℃で20分加熱．
室温で冷却．
0.1 mlのテトラエチレンペンタミンを加え撹拌．
1 mlのジエチルエーテルを加え撹拌して発色物質を抽出し，エーテル層の520 nmでの吸光度を測定（あるいは目視でエーテル層の色調観察）．
注意
有機リン農薬の種類によって発色の程度が異なるので，疑われる農薬で発色の程度を確認する．
キット化したものが関東化学から発売されている．
有機りん系農薬検出キット（関東化学，31115-96，10回分 9,500円）
文献
Clinica Chimica Acta 291:9-18 (2000).
有機リンおよびカーバメート剤の簡易検出法
（コリンエステラーゼ活性阻害作用の検出）
原理
正常血清と試料を反応させ，血清コリンエステラーゼ活性が低下すれば陽性とする．
コリンエステラーゼ活性は，Ellman法（Biochem. Pharmacol. (1961) 7:88-95）で測定．基質にアセチルチオコリンを用い，遊離するチオコリンをDTNBと反応させ，生成する黄色色素で検出する．
試薬
0.1 M トリス塩酸緩衝液
TRIZMA BASE（シグマ）1.2 g に蒸留水およそ80 mlを加えて溶解後，1 N HClでpHを8.5に調整後100 mlにメスアップ
0.075 M アセチルチオコリン
よう化アセチルチオコリン 217 mgを蒸留水に溶かして全量を10 mlとする．
0.01 M DTNB
5, 5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸) 39.6 mg を0.1 M トリス緩衝液で溶かして全量を10 mlとする（用事調製）．
方法
正常牛血清と試料（尿，第一胃液，抽出水溶液）を等量混合し，30℃で60分反応．
トリス緩衝液 2.88 ml，アセチルチオコリン溶液 20μl，DTNB溶液 100μlを混合し，30℃で3分加温．
試料と反応させた血清40μリットルを加え，30℃で412 nmでの吸光度を3分間記録（1分間あたりの吸光度の変化を記録）．
ブランク（ダブルビームではreference側）には，反応液に水40μlを加えたものを使用．
対照（正常血清と水を反応させたもの）と比較し，黄色色素の生成が少なければ，試料中にコリンエステラーゼ活性阻害物質が存在する．
無処置の血清を使えば，その血清のコリンエステラーゼ活性を測定できる（本来はコリンエステラーゼ活性測定法）．
コリンエステラーゼ活性は1分間あたりの黄色色素の生成量（μmoles）で表す．黄色色素の分子吸光係数は 13600/cm/M （412 nm）．
文献
図説動物実験の手技手法．1981 共立出版．pp105-109.
最新裁判化学．1994 南江堂．pp204-205.
注意
植物の中には，コリンエステラーゼ活性阻害作用を持つ物質を含むものがあるので注意を要する．
（最終更新：2005.1.11）
