牛乳タンパク質と遺伝性疾患ＢＬＡＤの遺伝子型同時判定法

［要約］乳タンパク質カッパーカゼインと遺伝性疾患ＢＬＡＤの遺伝子型を１本の試験管で増幅から制限酵素消化までを行うことで、短時間でかつ簡易に遺伝子型同時判定を可能とする手法である。

北海道農業試験場・畜産部・家畜育種研究室

［連絡先］　011-857-9270

［部会名］　畜産･草地

［専門］　バイテク

［対象］　家畜類

［分類］　指導

［背景・ねらい］

カッパーカゼイン（κ−ＣＮ）は牛乳品質の重要な成分であり、チーズ製品の加工特性に関連している。ウシ白血球粘着不全症（ＢＬＡＤ）は感染症に罹りやすくなる遺伝性疾患で個体損失につながる。乳タンパク質のみならず疾病も考慮した適正な交配計画の実施を可能とするため、両遺伝子の増幅から制限酵素消化までを１本の試験管で行い、短時間でかつ簡易に遺伝子型を同時判定する方法を開発する。

［成果の内容・特徴］

１. ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）に登録されているκ−ＣＮとＣＤ１８（ＢＬＡＤの原因遺伝子）の塩基配列情報よりプライマーを設計した。ＰＣＲ法でＤＮＡの目的領域を同時増幅した後、２種類の制限酵素で同時消化を行い、遺伝子型はポリアクリルアミドゲル電気泳動法で同時検出した。

２. κ−ＣＮとＣＤ１８の遺伝子型を短時間でかつ簡易に同時判定するための最適なＰＣＲ−ＲＦＬＰ法の条件を確立した（図１）、（表１）。

３. 乳牛検定組合加入の一般酪農家５軒の牛群（５００頭）と北海道農業試験場の１牛群（９９頭）を供試牛（ホルスタイン種）として遺伝子型を解析した結果、κ−ＣＮでは６牛群間で遺伝子型頻度にばらつきが見られ、チーズ生産に適したＢ／Ｂ型の頻度は低かった（表２）。

４. ＣＤ１８の解析では、４牛群でＢＬＡＤキャリアーが確認され、そのうちの２牛群は８％以上の頻度で存在した。種雄牛ではＢＬＡＤ遺伝子の排除が進められているが、雌のＢＬＡＤキャリアーは生産され続けている実態が明らかとなった（表３）。

５. 雌側からのＢＬＡＤキャリアー排除を目的とする検査は行われていないため、本法は生産現場での利用が可能と思われる。

［成果の活用面・留意点］

１. 本法は一般牛群での適正な交配計画を実施するための一助となり、チーズ生産に関連する優良遺伝子であるκ−ＣＮ−Ｂ型の集積と感染病関連の不良遺伝子ＢＬＡＤの排除に利用できる。

［その他］

研究課題名：ＤＮＡマーカ−による乳牛の生産性関連形質の解析

予算区分：経常・場特定

研究期間：平成８年度（平成８年〜平成１２年）

研究担当者：山本直幸、佐々木修、富樫研治、

発表論文等：山本直幸、佐々木修、富樫研治、κ−caseinとBLADの遺伝子型判定のためのPCR　RFLP法の検討、第５３回北海道畜産学会

山本直幸、佐々木修、富樫研治、κ−カゼインとＢＬＡＤの遺伝子型同時検出による牛群解析、北海道畜産学会報、４０、（投稿中）