受精卵クローン牛を種雄牛造成の際の産肉能力検定に利用するため、２分離受精卵の一方から種雄牛候補を生産し、もう一方から検定に供するクローン牛を３頭以上生産する技術の確立を目指す。ドナー細胞を増加させる技術として核移植を繰り返して実施するリクローン技術、受精卵を培養してES様細胞を作出する技術について検討する。

1. 桑実胚および小型化桑実胚の２分離方法として、再集合法、吸引法および分離法を２分離後の培養生存性で比較したところ、吸引法および分離法で２分離した受精卵の生存率が高く（表１）、これらの方法が適当である。
2. 性判別２分離受精卵の受胎率は33.8%である（表２）。また、Cランク受精卵は受胎例が得られない。
3. 性判別２分離受精卵由来のリクローン胚の作出を目的に３回の実験を行う。それぞれドナー受精卵３、３および２個を用いてクローン胚を作出し、これらのクローン胚のうち良好と思われる胚（ドナー受精卵Ｃ、Ｅ、ＦおよびＨ由来のクローン胚）をドナー胚としてリクローン胚を作出する（表３）。１胚当たりドナー細胞数の平均は27.6個で、ドナー胚数におけるリクローン胚の発生率は35.0%と良好であるが、クローン胚が得られない例（ドナー受精卵Ｇ）、十分な数のリクローン胚が得られない例（ドナー受精卵Ｃ）が見られる。
4. 新鮮および凍結受精卵から高率にES様細胞が作出できる（表４）。凍結融解したES様細胞の接着率および増殖率は、支持細胞を使用した場合は100%であり、ES様細胞の凍結保存が可能である。
5. ES様細胞を用いた核移植におけるレシピエント卵子の活性化法は、体細胞クローン型の胚の発生率が10%と受精卵クローン型の3%と比較して高い。また、ES様細胞をドナー細胞とする核移植胚の発生率は11.6%で、得られた25個の核移植胚のうち10個を受胚牛に移植し、3頭の受胎例が得られる。

1. 黒毛和種種雄牛候補の産肉能力検定確立のための資料とする。
2. クローン胚からのES様細胞の作出は検討していない。