いちごのウイルスフリー苗生産のためのウイルス検査法

［要約］

作製したイチゴマイルドイエローエッジウイルス（SMYEV)抗体によりSMYEVを検出できる。また、作製したLAMPプライマーを用いてSMYEV、イチゴモットルウイルス（SMoV)、イチゴベインバンディングウイルス（SVBV）を検出できる。

［キーワード］

いちご、ウイルス、ELISA法、LAMP法

［担当］道立中央農試・基盤研究部・遺伝子工学科、北海三共株式会社　
［代表連絡先］電話0123-89-2001
［区分］北海道農業・生物工学
［分類］技術・参考

［背景・ねらい］

栄養繁殖性であるいちごは、ウイルスに感染すると、生産性と品質が著しく低下するためウイルスフリー苗による栽培が不可欠であるが、その検査は経費、作業時間、検査者の技術といった多くの問題を抱えている。本試験では、現地で多く発生しているイチゴマイルドイエローエッジウイルス（SMYEV)のELISA法(酵素結合抗体法)と母株のウイルス高感度検査法として主要なウイルスであるSMYEV、イチゴモットルウイルス（SMoV)、イチゴベインバンディングウイルス（SVBV）のRT-LAMP法（遺伝子診断法）を確立し、いちごのウイルスフリー苗の安定生産に寄与する。

［成果の内容・特徴］

1. いちごの現地サンプルから高い頻度で検出されているSMYEVについて大腸菌発現系 でSMYEV-外被タンパク質遺伝子を発現させ、ウサギに免疫して特異的なSMYEVポリクローナル抗体を作製できる
2. 作製したSMYEV抗体は、DAS-ELISA法により罹病葉の生体重の100 〜1000倍希釈までSMYEVを検出が可能である（表1）。
3. 病害虫診断試験で持ち込まれたサンプルについてELISA法によりSMYEV検出が可能である（表２）。
4. いちごの主要なウイルスであるSMoV、SMYEV、SVBVの北海道分離株について遺伝子配列を明らかにしてプライマーを設計・選抜した特異性の高いプライマー（表３）を用いて、いちご罹病葉の粗抽出液からLAMP法によりSMYEVは罹病葉から高感度に検出することができる（表４）。
5. SMYEVのELISA法は多検体検定が可能で高価な機器を必要としないため、苗の検査や病害虫診断、生産現場での検査に利用が可能である。またSMYEV、SMoV、SVBVのLAMP法は、ウイルス遺伝子の抽出作業が煩雑で労力とコストがかかるPCR法に代わりウイルスフリー苗の母株のウイルスフリー検査に利用が可能である。