［要約］: パーティクルガンを用いた遺伝子導入法の条件を検討した結果、金粒子径1.6μm､ヘリウムガス圧1,350PSI､発射回数1回、塗布DNA量0.5μgが優った。ウイルス外被タンパク質（CP）遺伝子導入を試みたカンショカルス1,733個中3個のカルスから導入遺伝子が確認され、さらに11個の植物体が得られた。また形質転換植物体から導入CP遺伝子由来RNAが認められた。
［キーワード］: パーティクルガン、カンショ、遺伝子導入、サツマイモ斑紋モザイクウイルス
［担当］: 宮崎総農試・生物工学部、九州研

 ［連絡先］0985-73-2125
 ［区分］九州沖縄農業・植物バイテク
 ［分類］科学・参考

［背景・ねらい］: サツマイモ斑紋モザイクウイルス(SPFMV)強毒系統による帯状粗皮病は青果用カンショの重要な病害である｡その防除対策の一つとして､ウイルス抵抗性付与を目的に胚様体分化能を持つカルスにSPFMVCP遺伝子の導入を試みた｡

［成果の内容・特徴］

パーティクルガン法の遺伝子導入条件を検討した。その結果､金粒子径では1.6μm、ヘリウムガス圧は1,350PSIの効率が良かった（図1）。なお、発射回数、塗布DNA量による差は認められなかった（図1）ため、発射回数1回、塗布DNA量はマクロキャリアー当たり0.5μgとした。
遺伝子導入を試みたカルス塊1,733個をハイグロマイシン100ppm含有培地で選抜した結果、生存した4個中3個のカルス由来DNAからCP遺伝子特異的プライマーを用いたPCRによりCP遺伝子が確認された。
植物体再分化を試みた結果、合計11個の植物体が得られた。さらに、CP遺伝子をプローブにサザンハイブリダイゼーションを行った結果、形質転換体ではバンドが認められ、1個体当たり2個以上の遺伝子の導入が推定された(図2)。
形質転換体、非形質転換体としてウイルスフリー個体及びウイルス罹病個体を用い、ISOGENによりRNAを抽出した。DNA分解酵素処理を行ったRNA抽出物からCP遺伝子特異的プライマーを用いたRT-PCRにより、形質転換体及びウイルス罹病個体からCP遺伝子由来RNAが確認された(図3)。

［具体的データ］

図1　カンショカルスにおけるパーティクルガン法での遺伝子導入条件の比較

図2　SPFMVCP遺伝子を用いたサザンハイブリダイゼーション

図3　SPFMVCP遺伝子特異的プライマーによるRT-PCR

［その他］

研究課題名：遺伝子組換え実用化試験
予算区分　：県単
研究期間　：1996～2000