Navigation>>九州沖縄農業研究センター >> 研究成果情報 >> 平成１５年度目次

カラタチ及び中晩柑`天草'の根を識別するPCRマーカーの開発

［要約］
現地で問題となっている中晩柑`天草'の自根発生樹の判別を容易にするため、台木であるカラタチ及び穂木である`天草'の根を識別する安定したPCRマーカーを開発した。

［キーワード］
果樹、カンキツ、中晩柑、天草、カラタチ、PCRマーカー

［担当］
宮崎県総合農業試験場・生物工学部・遺伝子工学科 

［連絡先］0985-73-2125	
［区分］九州沖縄・植物バイテク	
［分類］技術・普及

［背景・ねらい］
現地で`天草'の品質低下が問題となっているが、その一因は穂木の`天草'が発根し、養分を充分に吸収し、樹勢が強くなるためである。そのため、細根から抽出したDNAを用いて、台木であるカラタチ及び穂木である`天草'の根を識別する技術を開発する。

［成果の内容・特徴］
  1. PHYTOPURE（アマシャムライフサイエンス社製）を用い、細根0.1gからDNAを抽出する。

  2. カラタチの寒冷ストレスから誘導されるタンパク質遺伝子（CORc115）の上流域と下流域の情報を元にプライマーを設定し、rTaqDNA合成酵素を用い、次の条件で増幅（PCR)を行い、多型を示すバンドを得る（図1）。
    PCR条件：摂氏95度・2分の熱変性の後、摂氏94度・30秒、摂氏50度・30秒、摂氏72度・1分、35回の増幅を行い、摂氏72度・7分の処理。

  3. 多型を示すバンドの塩基配列を解読し、DNAデータベースと照合した結果、カラタチ由来DNAで得られたPCR産物のみカラタチ由来CORc115遺伝子と100%の相同性を示し,また温州ミカン由来CuCOR19遺伝子と85%の相同性を示す（データ省略）。

  4. これらの情報を元に、プライマーを設計し（表1）、カラタチ及び天草由来DNAで遺伝子の増幅を行うと、カラタチ、`天草'及び両者の混合が判別できる共優性マーカーが得られる（図2）。

  5. PCR条件は下記のとおりである。
    摂氏95度・5分の熱変性の後、摂氏94度・10秒、摂氏64度・20秒、30回の増幅を行い、最後に摂氏64度・7分の処理。

  6. このプライマーでPCRを行えば、採集された根がカラタチ由来か、天草由来か、両者の混合かの判別が可能となる。

［成果の活用面・留意点］
  1. カラタチと天草が混合した際、片方の割合が極度に少なければ、増幅産物も減少するため、判別に注意を要する。

  2. 自根発生樹を確認したら増糖対策として、エチクロゼート乳剤2000倍を登録要件に基ずき2回散布すると効果的である｡

［具体的データ］

図1　CORc115遺伝子由来ﾌﾟﾗｲﾏｰによる多型


図2　`天草'及びｶﾗﾀﾁを識別するPCRﾏｰｶｰ


表1　カラタチ及び`天草'判別のための共優性マーカー

［その他］ 
研究課題名：地域特産カンキツの高品質安定生産に適した施設利用技術の開発
予算区分　：県単
研究期間　：2002年度
目次へ戻る