PCR法を用いたトマト萎凋病菌レースと根腐萎凋病菌の迅速診断法

Fusarium oxysporum f. spのpolygalacuturonaseの遺伝子配列をもとにトマト萎凋病菌に特異的な４種類のプライマーを開発した。各プライマーを組み合わせることによりトマト萎凋病菌の各レース並びにトマト根腐萎凋病菌を迅速に判別できる。

　トマト萎凋病対策のためには、農薬散布低減並びに低コスト生産に配慮すると、台木の利用が有効である。しかし、用いるべき台木の種類は萎凋病菌レースによって異なるため、病気に対応した台木を選定する必要がある。現在のレース判別は検定植物に病原菌を接種し、発病程度や病状から判断しているため、１か月以上を要し、迅速な台木の選定が困難である。そこで、病原菌に特異的なプライマーを設計し、PCR法を利用した病原菌判別技術を開発する。

１．	Fusarium oxysporumのendopolygalacuturonase及びexopolygalacuturonase遺伝子を解析し、その塩基配列をもとに４種類のプライマーを開発した（表1）。
２．	４種共通プライマーセットを用いることにより、F. oxysporum f. sp. lycopersici（トマト萎凋病菌）レース１，レース２，レース３及びf. sp. radicis-lycopersici（トマト根腐萎凋病菌）を特異的に検出できる（図1）。
３．	レース１・３判別セットによって、F. oxysporum f. sp. lycopersici レース１及びレース３を特異的に検出できる。レース２・３判別セットによって、レース２及びレース３を特異的に検出できる。根腐萎凋病菌判別セットによって、F. oxysporum f. sp. radicis-lycopersiciを特異的に検出できる（図1）。
４．	４種類のプライマーを組み合わせることにより、トマト萎凋病菌の各レース並びにトマト根腐萎凋病菌の４種を判別できる（図1）。
５．	16種類のF. oxysporum f. sp.を検定した結果、f. sp. conglutinans（キャベツ萎黄病菌）以外は判別できる（表2）。
６．	本方法は萎凋病感染組織から直接、PCR法による迅速診断にも応用可能である。

１．	PCRの条件はDNA濃度1.0pg/μl以上、変性温度94℃ (１分)，アニーリング温度62℃ (１分)，伸長温度72℃ (２分)、反復回数50回である。
２．	１塩基の相異を認識するプライマーであるため、PCR反応液は特に留意する（プライマー最終濃度100pM，dNTP最終濃度167μM）。

［具体的データ］

研究課題名：園芸作物病害の迅速診断技術の開発
予算区分：県単
研究期間：2002〜2004年度
研究担当者：平野泰志