| 1． |
TiプラスミドおよびRiプラスミドのvirC領域上に位置する診断用のプライマー組（VCF3：5'-GGCGGGCGYGCYGAAAGRAARACYT-3'、VCR3：5'-AAGAACGYGGNATGTT
GCATCTYAC-3'）を設計した。 |
| 2． |
各種植物等から分離されたAgrobacterium属菌のうち、biovarが異なり、Tiプラスミド、Riプラスミドのいずれかを有する9菌株及び非病原性の1菌株を用いて、本プライマー組（VCF3、VCR3）あるいは従来のPCRプライマー組（VCF、VCR：澤田(1995)ら）を用いコロニーPCRを行ったところ、本プライマー組においてコロニーPCRによる病原性菌株の検出が可能であった（図1）。電気泳動により、これらはサイズが414bpのバンドとして検出される（図1）。 |
| 3． |
岩手県及び青森県のリンゴ根頭がんしゅ病罹病樹から分離した29菌株を用いて、コロニーPCRを行っところ、トマトに病原性の認められた18菌株を特異的に検出できた（図2）。 |
| 4． |
PCR 用Taq ポリメラーゼ酵素として、主にAmpliTaq Gold（Applied Biosystems）を用いたが、HotStar Taq（QIAGEN）、Ex Taq（TaKaRa)のいずれを用いた場合も同程度の検出感度である。 |
| 5． |
上記のプライマー開発により、菌株よりDNA抽出を行うことなく、コロニーPCR法により、リンゴ根頭がんしゅ病菌を簡易診断することが可能である。 |
