メロンACC合成酵素プロモーター領域の単離

［要約］
メロン成熟果実由来のACC合成酵素遺伝子の塩基配列を基に、その5'上流域を単離した。単離したフラグメントをGUS遺伝子上流に配したベクターを構築し、トランジェントアッセイによりプロモーター活性を有することを認めた。 
島根県農業試験場・作物部・生物工学科
［連絡先］ 0853-22-6650
［部会名］ 生物工学
［専門］    バイテク
［対象］    野菜
［分類］    研究

[背景・ねらい］
　成熟した果実で特異的に遺伝子の発現を制御するプロモーターを獲得するために、メロン成熟果実由来の1-アミノシクロプロパン-1-カルボン酸（ACC）合成酵素遺伝子の5'上流域を単離し、そのプロモーター活性を検討する。

[成果の内容・特徴］

  1. メロン‘おくに’の全DNAをCTAB法で抽出し、制限酵素で消化後、それぞれセルフライゲーションを行った。DDBJデータベースのメロン成熟果実由来ACC合成酵素遺伝子の塩基配列を基にプライマーを設計し、セルフライゲーションしたメロンDNAをテンプレートにインバースPCRを行った。EcoRIで消化したテンプレートにより約1.6kbpのPCR産物が得られた。このフラグメントをシーケンスベクターにクローニングし、塩基配列を決定した（図１）。
  2. 導入ベクターpBI221をもとに、CaMV35Sプロモーターを除いたベクターと、CaMV35Sプロモーター部位にACC合成酵素遺伝子のプロモーター領域を組み込んだベクターを作成し、パーティクルガン（株式会社タナカ　ガス圧5kg/cm2、距離55mm）でメロン、キュウリの果実へ導入した。15時間15℃でインキュベート後β-グルクロニダーゼ（GUS）活性を調べたところ、CaMV35Sプロモーターを除いたベクターではGUS活性をまったく認めなかったが、ACC合成酵素プロモーターではCaMV35Sプロモーターと同程度の発現を確認した（図２）。

[成果の活用面・留意点］

  1. 単離した5'上流域をプロモーターとして遺伝子組換えに利用した場合、特異的な発現制御が期待できる。 
[その他］
研究課題名 ： 有用遺伝子導入法による新規地域農作物作出技術の開発
予算区分    ： 地域先端
研究期間    ： 平成10年度（平成9〜11年）
研究担当者 ： 杉山万里、近重克幸
研究論文等 ： なし
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