トマトかいよう病菌選択培地CMM培地を用いた種子検定法

[背景・ねらい］

　トマトかいよう病は、種子伝染する細菌性病害である。本病の防除には健全種子の確保が不可欠であり、種子の検査態勢の強化が望まれる。そこで、選択培地としてCMM培地を用いた種子検定を検討する。

[成果の内容・特徴］

1. CMM培地（Alvarez and Kaneshiro, 1999、表１）を用いると、施設栽培での全身感染株から採種した2001年産（採種５年後）および2006年産（採種６か月後）のミニトマト種子からかいよう病菌が検出される（表２）。
2. リン酸バッファー（PBT：pH7.4、0.07M、0.02％Tween20添加）12mlにミニトマト種子2.4g（約2000粒）を４℃で一晩浸漬後、ストマッカーでホモジナイズした抽出液をCMM培地に塗布して、26℃で４〜５日間培養する。
3. 菌液をCMM培地に塗布後、26℃で５日間の培養でコロニーの直径が3mm程度となり、黄色、正円形、平滑、ドーム状の特徴的なコロニーを形成する（図１）。
4. 普通寒天培地を100としたときのCMM培地の計数効率は57である。
5. 少量のロットからの検出法として、ジルコニアビーズを入れたセイフロックチューブに種子100粒とPBT200μlを入れ、４℃で一晩静置した後にレッチェ製のミキサーミルで15回/秒で30秒間処理し（表３）、この抽出液100μlをCMM培地に塗布し、26℃で４〜５日間培養する。
6. ５の方法を用いると種子１粒からでもかいよう病菌の検出が可能である。種子1粒に対し、PBT200μlを用いる。上記2006年産種子100粒について1粒ずつ検定すると、40粒からかいよう病菌が検出され、１粒当りの菌密度の平均は4.5cfuである。

[成果の活用面・留意点］

1. 扁平な黄色のコロニーが出現することがあるので、対照菌株を塗布し、形状を比較する。また、特異抗血清を用いて確認するのが望ましい。

［具体的データ］

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