甘しょのβ-アミラーゼ活性の簡易測定法

※アーカイブの成果情報は、発表されてから年数が経っており、情報が古くなっております。
同一分野の研究については、なるべく新しい情報を検索ください。

要約

合成試薬であるp-nitrophenyl-α-D-maltopentaoseを基質に用いて、甘しょのβ-アミラーゼ活性が測定できる。本法は従来の可溶性澱粉を基質とした還元糖測定法よりも簡便で、測定に要する時間も短い。

担当:農業研究センター・作物生理品質部・資源作物品質評価研究室
連絡先:0298-38-8563
部会名:作物生産
専門:食品品質
対象:いも類
分類:研究

背景・ねらい

甘しょの甘味には、生いも中に存在する単糖類、少糖類のほか、加熱過程に生育するマルトースの寄与が大きい。そこで、甘味生成に寄与する因子の一つであるβ-アミラーゼの活性を簡易に測定できる方法を開発する。

成果の内容・特徴

合成試薬であるp-nitrophenyl-α-D-maltopentaose(PNPG5)を基質として用いることにより(図1)、甘しょのβ-アミラーゼ活性が測定できる。
生いもの小片(2～3mm角程度)を2倍量程度の水とともにホルジネートとし、遠心分離(10000×g程度、10分間)により酵素抽出液を得る。水及び緩衝液(後述)で5000倍程度に希釈し、活性測定に供する。
本法では、pH5.6付近に最適pHのピークがあるため(図3)、クエン酸ナトリウム緩衝液(反応時の濃度20mM程度)を用いてpHを整える。
酵素液0.2mlと基質液0.2ml(PNPG5 4.75mg/ml、α-グルコシダーゼ 100U/ml)を別々に40°Cで2分間プレインキュベイションした後混合し、10分間反応させる。1%トリスヒドロキシメチルアミノメタン3mlを加えて反応を停止させ、生成したパラニトロフェノール量を410nmの吸光度で測定する(図2)。
従来の可溶性澱粉を基質として生成した還元糖測定によるβ-アミラーゼ活性測定法と比較して、還元糖測定の際の加熱等の煩雑な操作がないため簡便である(図2)。
酵素液抽出以後、希釈操作を含めて、14点の試料の測定に要する時間は、従来の還元糖測定法が3時間であるのに対し、本法では1時間である。
還元糖測定法と本測定法の測定値の間には、高い相関関係がある(図4)。
本法では特殊な装置・器具を必要としない。