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シロクローバ茎頂の低温及び超低温保存技術 

東北農業試験場・草地部・牧草育種研究室
［部会名］　畜産
［分科会名］
［分類］　　(3)

［成果の内容］
  1. 技術・情報の内容及び特徴
    1. 低温保存：
      茎頂組織は低温(4度C)下で、約1年間は安定して保存することが可能である (表1)が、それ以上の期間の保存では生存率が 低下するため、新鮮な培地の添加ないし交換が必要であると考えられた。
    2. 超低温保存：
      液体窒素(-196度C)による凍結処理法により、茎頂組織の高い生存率が得られたが、 この方法は次のようである(図1)。茎頂組織を 5％DMSO(ジメチルスルフォキシド)及び5％グルコースを加えた培地で2日間、 4度Cで前培養して、10％DMSO及び10％グルコースを含む凍結媒液中で、0.3度C/分 の冷却速度で、-40度Cまで予備凍結し、液体窒素に入れ保存した。その後、40度Cの 温水で急速に融解後、洗浄せずに寒天培地上の濾紙に直接組織を置床した。この 方法によると、品種の耐寒性に関係なくどの品種においても80％以上の高い生存率が 得られた(表2)。一方、茎頂組織を液体窒素中で 10ヶ月間保存したが、生存率の低下はなかった。
  2. 技術・情報の適用効果
    シロクローバは他殖性植物で遺伝的にヘテロなため、優良な遺伝子型を栄養体で 保存する必要があり、これまで栄養体を圃場及びポットで保存してきたが、 モザイク病などの感染により、有用な遺伝子型の消失がしばしばみられた。今回 開発した保存法は、遺伝資源として栄養体をウイルスフリーの状態で中・長期間 安定して保存することを可能にすると考えられる。低温保存は、中期的な保存に、 超低温保存は長期的な遺伝資源の保存に利用される。
  3. 適用の範囲
    栄養体で遺伝資源を保存する育種研究機関。
  4. 普及指導上の留意点
    操作全般にわたって、雑菌の混入に注意を払う必要がある。 

［その他の特記事項］
研究課題名：シロクローバのランナー及び培養細胞の長期保存、
　　　　　　他殖性牧草の遺伝資源の超低温保存技術の確立
予算区分　：育種強化、特研(植物保存)
研究期間　：昭和60年〜平成元年、昭和63年〜平成2年
発表論文等：Proc. of the 6th Internatl. Congr. of SABRAO, 147-150.
　　　　　　Plant Science (印刷中)